Xét nghiệm elisa là gì, xét nghiệm elisa tìm hiv là xét nghiệm gì
ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) là 1 trong những chuyên môn sinc hóa nhằm vạc hiện nay chống thể hay chống nguyên ổn vào chủng loại buộc phải đối chiếu. Lúc này ELISA được sử dụng rộng thoải mái trong không ít nghành nghề phân tích nlỗi y học tập, NNTT và đặc biệt là trong những quy trình chất vấn bình yên quality các sản phẩm thực phđộ ẩm.
Bạn đang xem: Xét nghiệm elisa là gì, xét nghiệm elisa tìm hiv là xét nghiệm gì
1.Khái niệm về ELISA
Nguim tắc: Phương pháp ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay- xét nghiệm dung nạp miễn kháng liên kết với enzyme) có khá nhiều dạng nhưng điểm lưu ý tầm thường là hầu hết dựa trên sự kết hợp quánh hiệu giữa phòng ngulặng và kháng thể, trong đó phòng thể được đính với 1 enzyme. lúc nêm thêm cơ hóa học phù hợp (thường xuyên là nitrophenol phosphate) vào phản ứng, enzyme vẫn tbỏ phân cơ chất thành một hóa học tất cả color. Sự lộ diện màu sắc chứng tỏ vẫn xẩy ra phản bội ứng sệt hiệu thân chống thể cùng với phòng nguyên ổn với trải qua độ mạnh màu nhưng hiểu rằng mật độ kháng ngulặng tốt chống thể đề xuất phân phát hiện tại.
Phương pháp này được thiết kế mang đến vấn đề phát hiện nay và định lượng trang bị hóa học như peptides, protein, antibodies, hooc môn,… thường thì nó có cách gọi khác do một tên gọi khác là EIA (Enzyme ImmunoAssay)
Kĩ thuật này tương đối tinh tế cùng đơn giản và dễ dàng, có thể chấp nhận được ta khẳng định phòng nguim hoặc kháng thể ở 1 độ đậm đặc khôn xiết tốt (khoảng tầm 0,1 ng/ml). So với kỹ năng miễn dịch pchờ xạ (RIA- Radio Immuno Assay) thì kinh nghiệm này phải chăng tiền và bình yên rộng mà vẫn đảm bảo an toàn độ đúng đắn hệt nhau. ELISA được dùng để xác minh các tác nhân gây bệnh dịch nlỗi virus, vi khuẩn, nnóng, kí sinh.
Kĩ thuật ELISA bao gồm cha nguyên tố ttê mê gia phản ứng là: chống ngulặng, chống thể cùng chất sản xuất màu; triển khai qua nhị bước:
- Phản ứng miễn kháng học: Là sự kết hợp giữa kháng nguim với phòng thể- Phản ứng hóa học: Thông qua hoạt tính xúc tác của enzyme có tác dụng giải pchờ oxy ngulặng tử
(Trích tự Chemicon International)
2.Phân các loại ELISA2.1.Direct ELISA (ELISA trực tiếp)
Direct ELISA: Đây là dạng đơn giản tuyệt nhất của phương pháp ELISA. Trong số đó, kháng nguyên buộc phải phân phát hiện sẽ tiến hành gắn thêm thẳng lên bề mặt giá thể và sẽ được phát hiện bởi một phòng thể độc nhất (chống thể này đã được thêm enzyme).
Sơ thứ 2.1: Tiến trình triển khai bội nghịch ứng ELISA trực tiếp
- Ưu điểm: Đơn giản nhất- Nhược điểm:+ Độ quánh hiệu bị số lượng giới hạn vì chưng thường thì chống nguim có ít nhất là 2 epitope (phơi bày phòng nguyên) nhưng mà cách thức này chỉ sử dụng 1 phòng thể thêm vào trong 1 epitope.+ Phải đánh dấu đến từng kháng thể chuyên biệt cùng với từng đối tượng người tiêu dùng.2.2.ELISA gián tiếp
Indirect ELISA: Phương thơm pháp này không giống Direct ELISA ở chỗ phòng thể bắt chống ngulặng ko được đính enzyme mà lại nó là mục tiêu đính sệt hiệu của một kháng thể không giống (phòng thể này mới là chống thể được gắn với enzyme).
Sơ thiết bị 2.2: Tiến trình thực hiện làm phản ứng ELISA loại gián tiếp
- Ưu điểm: Kháng thể gắn thêm enzyme có thể áp dụng nhằm ghi lại cho nhiều một số loại kháng nguyên buộc phải thuận lợi với kinh tế tài chính rộng, dễ dãi kinh doanh hóa.- Nhược điểm: Độ quánh hiệu của từng chống ngày tiết tkhô giòn là không giống nhau. Điều này dẫn đến tác dụng không giống nhau giữa những thí nghiệm với vì vậy cần được thể nghiệm với khá nhiều phòng ngày tiết thanh hao khác nhau nhằm hiệu quả có thể tin cẩn được.
2.3.Sandwich ELISA
Đây là một dạng ELISA được áp dụng thông dụng duy nhất vào trong thực tế vày nó mang đến làm phản ứng mạnh bạo và nhạy. Được điện thoại tư vấn là “sandwich” là do hiệu quả thí nghiệm được Reviews thông qua sự phối kết hợp của hai nhiều loại phòng thể là chống thể bắt (capture antibodies) với kháng thể phát hiện nay (detection antibodies). Kỹ thuật này cũng khá được phân có tác dụng nhì dạng là Direct sandwich ELISA (DAS-ELISA - Double antibody sandwich) với Indirect sandwich ELISA (TAS-ELISA – Triple antitoàn thân sandwich).
DAS ELISA có sự bám bị động của kháng thể vào pha rắn (lòng giếng). Những chống thể này tiếp nối kết hợp với những phòng ngulặng được thêm vào. Những phòng nguim được trộn loãng trong blocking buffer nhằm ngăn sự dính ko siêng biệt của chúng nó vào trộn rắn. Tại phía trên, gần như phần của blocking buffer không nên cất bất kỳ chống ngulặng nào nhưng mà hoàn toàn có thể kết hợp với kháng thể bắt. Sau Khi ủ cùng rửa, chỉ với tinh vi phòng nguyên ổn - kháng thể kết dính trộn rắn.
Kháng thể bắt sau đó được cấp dưỡng. Do vậy, đó là sự phối hợp thẳng với phòng nguyên đích với phòng thể bắt. Kháng thể trang bị hai này hoàn toàn có thể tương tự phòng thể một hoặc không giống về nguồn động vật giỏi loại động vật cấp dưỡng phòng thể. Sau khi ủ, cọ, thêm cơ chất vào cùng gọi bên trên sản phẩm công nghệ đo quang phổ. Vì sử dụng một kháng thể kết nối với enzyme bắt buộc hệ thống bị số lượng giới hạn về tính chất siêng biệt và phần lớn thành phần nối liền với chống thể siêng biệt. Như vậy số lượng giới hạn sự linh hoạt của phương pháp, ví như mỗi kháng thể được thực hiện đề xuất được khắc ghi riêng (đến đa số kháng nguyên không giống nhau). Theo biện pháp này, direct ELISA bị số lượng giới hạn về sự chuẩn bị chống thể. Hệ thống cũng trở thành giới hạn ở đoạn phòng nguim bắt buộc gồm tối thiểu hai epitope bởi cả hai kháng thể bắt và phân phát hiện nay đa số phối hợp thẳng với phòng ngulặng.
Kháng thể bắt trên pha rắn cùng chống thể phân phát hiện có thể hạn chế lại đều epitope khác nhau trên tinh vi kháng ngulặng. Do kia, dễ dãi khi khảo sát sự khác biệt nhỏ Một trong những phòng nguim nếu sử dụng phòng thể phát hiện nay và phòng thể bắt khác nhau. Việc thực hiện cùng một chống thể bắt với vạc hiện rất có thể dẫn mang đến sự việc lúc bao gồm số lượng giới hạn về địa điểm gắn kết sẵn tất cả cho sự vạc hiện nay. Kích thước cùng quan hệ không gian của các epitope trên chống ngulặng đích là khôn cùng đặc biệt quan trọng và rất có thể tác động dũng mạnh đến phân tích.
Sandwich ELISA rất có thể được chia thành nhị hệ thống:
2.3.1 Sandwich ELISA trực tiếp
- Ưu điểm: Có thể vạc hiện sự biệt lập nhỏ tuổi thân các kháng nguyên trường hợp sử dụng kháng thể bắt cùng phòng thể phạt hiện nay không giống nhau.- Vì cách thức này còn có ưu điểm hơn hẳn phần lớn phương pháp không giống mà công ty chúng tôi chọn phương thức này nhằm chẩn đoán dịch virut vẫn nghiên cứu.
Chụ ý: trường hợp sử dụng kháng thể bắt và chống thể phân phát hiện nay giống nhau hoàn toàn có thể dẫn đến vụ việc giả dụ gồm sự giới hạn vị trí phối hợp sẵn bao gồm để phân phát hiện nay. Mối tình dục về form size với địa chỉ không khí của các epitope cũng có ảnh hưởng cho nghiên cứu.
Xem thêm:
2.3.2 Sandwich ELISA gián tiếp
Chuyên biệt rộng Direct sanwich ELISA vày antispecies kháng thể được đính thêm enzyme không phản ứng với kháng thể bắt phòng nguyên.
2.4. Phản ứng ức chế /cạnh tranh
Phản ứng tuyên chiến và cạnh tranh với tức thị hai chất tham gia bội phản ứng thuộc ái lực bắt cặp với chất vật dụng bố. Phản ứng tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh đúng chuẩn thì nhị chất tuyên chiến đối đầu buộc phải được chuyển vào bên cạnh đó.
Sự biệt lập thân khắc chế với tuyên chiến và cạnh tranh. Cả nhì làm phản ứng đều phải có sự tđê mê gia của nhị kháng thể phản bội ứng với kháng nguyên. Nếu một kháng thể được ủ trước bội nghịch ứng đó được Call là khắc chế (blocking/ inhibition assays). Phản ứng cạnh tranh sở hữu nghĩa cả nhì kháng thể nhận thêm vàođồng thời cùng nhau (hình 1).
2.4.1. Direct C-Elisa: Kiểm tra chống nguyên
Direct C-ELISA bình chọn phòng nguyên được miêu tả sinh hoạt sơ đồ 2.5
Trong khối hệ thống thẳng, lượng chống nguyên ổn bên trên bề mặt đĩa và lượng phòng thể thêm enzyme đã được chuẩn chỉnh độ để tối ưu. Kháng nguyên cùng phòng thể gắn thêm enzyme được phân phối đĩa cùng một dịp để chế tạo ra ưu cầm đối đầu.
Nếu chống nguyên tương tự hoặc cùng như kháng nguyên đã có thêm trên đĩa thì phòng thể gắn thêm enzyme sẽ đính thêm lên chống nguyên ổn này. lúc nồng độ của phòng nguyên ổn đối đầu cao đang ngăn uống cản ngẫu nhiên sự phối hợp của kháng thể gắn enzyme cùng với kháng nguyên ổn bên trên mặt phẳng đĩa (cạnh tranh 100%). Nếu mật độ kháng nguyên tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh giảm (ví dụ : pha loãng) sự tuyên chiến đối đầu sẽ sút. do đó mật độ chống ngulặng tuyên chiến và cạnh tranh càng tốt thì độ hấp phụ màu sắc càng giảm.
Kháng nguyên tuyên chiến đối đầu rất có thể có thêm trực tiếp vào đĩa trường hợp nó được trộn loãng trong blocking buffer trước lúc thêm phòng thể gắn enzyme.
Mức độ cạnh tranh theo thời hạn phụ thuộc vào vào côn trùng đối sánh của độ đậm đặc phân tử phải khám nghiệm với chống nguim trên mặt phẳng đĩa (với cường độ tương đương của chống nguyên).
Sau Lúc ủ với rửa, lượng phòng thể được lưu lại được định lượng sau khoản thời gian thêm cơ hóa học. Khi không có kháng nguyên trong mẫu mã đánh giá hay không gồm sự tương đồng của phòng nguyên ổn thì không tồn tại sự gắn kết với kháng nguyên ổn được đánh dấu cùng không có sự cạnh tranh với chống nguyên ổn này. Kết quả là mẫu bao gồm chứa chống ngulặng thì sự tuyên chiến đối đầu làm giảm cường độ màu sắc còn đối bệnh âm thì không.
2.4.2.Direct C-Elisa: Kiểm tra phòng thể
Direct C-ELISA kiểm tra kháng thể được miêu tả chi tiết sinh hoạt sơ đồ gia dụng 2.6.
Direct C-ELISA khám nghiệm chống thể tựa như với Direct C-ELISA kiểm soát chống thể. Sự tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh ngơi nghỉ đây là giữa kháng thể vào mẫu mã với chống thể được tấn công dẫu cùng với các vị trí trên kháng nguim trên đĩa. Mẫu với chống thể khắc ghi được trộn với nhau trước khi chế tạo đĩa.
3.Các yếu tố tác động mang lại độ nhạy bén của bội nghịch ứng ELISA
- Số lượng chống thể thứ nhất được đã nhập vào lòng giếng- Ái lực của chống thể trước tiên đối với chống nguyên- Ái lực của phòng thể thứ nhì đối với kháng nguyên
4.Các yếu tố tác động đến kết quả ELISA
Nếu những đối chứng âm mang lại kết quả dương tính thì có thể bởi sự lây nhiễm từ bỏ chất chế tạo ra màu sắc hoặc trường đoản cú kháng thể được lưu lại hoặc bao gồm những đối chứng bị lan truyền. Nếu màu sắc ko mở ra đối với đối bệnh dương hoặc so với mẫu thì nên chất vấn lại toàn bộ hoá hóa học bao gồm: hạn sử dụng, độ đậm đặc, ĐK bảo vệ Nếu color lộ diện rất thấp đối với đối triệu chứng dương và cả mẫu kiểm tra thì đề xuất chất vấn lại phòng thể được thêm enzyme và mật độ của chất tạo ra color. Nếu bao gồm chế tạo ra color so với mẫu cơ mà không sản xuất color cùng với đối bệnh dương thì hoàn toàn có thể khám nghiệm lại nguồn gốc đối chứng, hạn thực hiện với điều kiện bảo vệ. Lúc chạy lại một phân tích vào ĐK sẽ gặp gỡ sự nuốm thì nên làm chuyển đổi một nguyên tố thí nghiệm.Chuyên mục:
