Kỹ thuật sắc ký cột là gì, kinh nghiệm lựa chọn: sắc ký cột

Sắc ký dựa vào định nghĩa hệ số phân vùng. Phân vùng chất chảy thân nhì dung môi là không thay đổi. Ứng dụng của sắc ký kết dựa vào câu hỏi họ tạo một dung môi bất động (bằng phương pháp dung nạp bên trên ma trận hỗ trợ rắn) với một sản phẩm công nghệ dịch rời. Nếu ma trận hỗ trợ hoặc pha tĩnh là rất nlỗi giấy, silica,…thì sẽ là sắc đẹp cam kết pha thuận còn ví như nó ko phân cực (C-18) thì đó là pha ngược chở lại.

Bạn đang xem: Kỹ thuật sắc ký cột là gì, kinh nghiệm lựa chọn: sắc ký cột

Sắc ký là nghệ thuật quan trọng đặc biệt trong phòng thí nghiệm

1. Sắc ký kết là gì?

Sắc ký là một trong nghệ thuật phòng phân tách để tách hỗn hợp. Hỗn phù hợp này được phối hợp vào một chất lỏng Call là trộn đụng, di chuyển qua một môi trường thiên nhiên chứa vật liệu không giống Hotline là trộn tĩnh. Các yếu tắc khác nhau của các thành phần hỗn hợp di chuyển sinh sống vận tốc khác nhau, khiến cho bọn chúng bóc tách ra. Sự phân tách dựa trên việc phân vùng biệt lập giữa các trộn di động cùng tĩnh. Sự khác hoàn toàn trong hệ số phân vùng của hòa hợp chất dẫn đến việc giữ giàng vi không đúng trên trộn tĩnh, trường đoản cú đó ảnh hưởng đến việc phân bóc tách.

2. Mục đích áp dụng của sắc ký

Sắc ký kết hoàn toàn có thể là dùng để chuẩn bị hoặc phân tích:

- Sắc cam kết sẵn sàng được dùng để làm bóc tách các nhân tố của hỗn hợp để thực hiện cho các phân tách trong tương lai, thế vày đối chiếu. Đây được coi như một hiệ tượng tinh chế.

- Sắc ký kết đối chiếu thường được tiến hành cùng với lượng vật liệu nhỏ dại rộng với nhằm tùy chỉnh thiết lập sự hiện hữu hoặc đo Xác Suất kha khá của chất đối chiếu vào các thành phần hỗn hợp. Cả nhì ko sa thải lẫn nhau. 

3. Các thuật ngữ sắc đẹp ký

- Chất phân tích là hóa học buộc phải bóc trong quy trình nhan sắc ký. Nó hay là đầy đủ hóa học cần thiết phải đem các thành phần hỗn hợp ban đầu.

- Sắc cam kết phân tích được áp dụng để xác minh sự trường thọ cùng nồng độ hóa học so sánh trong mẫu mã.

- Pha liên kết là pha tĩnh được links cộng hóa trị với những hạt cung ứng hoặc thành trong của ống cột.

- Sắc cam kết đồ là Áp sạc ra trực quan liêu của dung nhan ký. Trong ngôi trường phù hợp phân tách buổi tối ưu, các đỉnh hoặc mẫu khác biệt bên trên dung nhan ký đồ dùng tương ứng cùng với các yếu tố không giống nhau của các thành phần hỗn hợp được bóc tách.

Cột x của nhan sắc ký trang bị biểu thị thời hạn lưu

+ Trục x vẽ thời hạn lưu

+ Trục y vẽ một biểu lộ khớp ứng (ví dụ nhận được bằng máy đo quang phổ, vật dụng quang phổ khối hoặc những các loại đồ vật dò khác) được tạo ra bởi vì những thiết bị so sánh thoát thoát ra khỏi hệ thống. 

+ Trong ngôi trường đúng theo hệ thống tối ưu, tín hiệu tỷ lệ thuận cùng với mật độ của hóa học đối chiếu rõ ràng được bóc tách ra.

- Máy nhan sắc ký là vật dụng được cho phép phân bóc tinch vi nlỗi sắc ký kết khí hoặc bóc dung nhan cam kết lỏng.

- Sắc ký là 1 trong những phương pháp phân tách trang bị lý phân pân hận những yếu tố nhằm phân bóc giữa nhì pha, một pha (trộn tĩnh), trộn kia (pha động) dịch chuyển theo một phía xác định.

- Dịch rửa giải là dung môi mang chất phân tích thuộc pha đụng bong khỏi cột, chúng ta có thể Hotline nó là nước thải.

Xem thêm:

- Eluite là hóa học đối chiếu, chất tổng hợp.

- Eluotropic là một danh sách những dung môi được xếp hạng theo sức mạnh rửa giải của chúng.

- Pha bất động là pha tĩnh được cố định bên trên các hạt cung cấp hoặc trên thành trong của ống cột.

Tổng quan tiền về sự phân tách dung nhan tố của nhan sắc tố quang hợp

- Pha động là trộn dịch rời theo 1 hướng xác minh. 

+ Nó có thể là hóa học lỏng (LC cùng Điện hóa mao quản (CEC)), chất khí (GC) hoặc hóa học lỏng rất tới hạn (sắc đẹp ký cực kỳ tới hạn chất lỏng, SFC). 

+ Pha động bao gồm mẫu mã được tách bóc hoặc phân tích và dung môi dịch rời chủng loại qua cột. Trong trường hòa hợp sắc đẹp cam kết cột lỏng cao thế (HPLC), pha hễ bao gồm dung môi ko phân cực nlỗi hexane sống trộn thường hoặc dung môi phân cực như metanol trong pha ngược của sắc cam kết với chủng loại được tách bóc ra. 

+ Pha rượu cồn di chuyển hẳn qua cột sắc ký kết (pha tĩnh) và chủng loại shop với trộn tĩnh sẽ tiến hành tách bóc ra.

- Thời gian lưu là thời gian đặc trưng nhằm một hóa học so với ví dụ đi qua hệ thống (từ đầu vào cột mang lại đầu dò) trong các ĐK sẽ đặt. 

- Mẫu là nội dung được so với vào dung nhan ký kết. Nó hoàn toàn có thể gồm một yếu tố duy nhất hoặc một tất cả hổn hợp của những nhân tố. 

- Chất tan là những nhân tố mẫu mã trong sắc cam kết phân vùng.

- Dung môi là chất có tác dụng phối hợp một chất không giống, đặc biệt là trộn cồn lỏng vào sắc ký kết lỏng.

- Pha tĩnh là chất thắt chặt và cố định trên nơi đến quy trình sắc ký kết nlỗi silica trong nhan sắc ký kết lớp mỏng dính.

- Máy dò là qui định được áp dụng nhằm phát hiện định tính với định lượng những chất so với sau khoản thời gian tách bóc.

Máy dò giúp phạt hiện tại định tính với định lượng chất sau phân tích

4. Các kỹ thuật nhan sắc ký

4.1. Sắc ký kết cột

- Sắc ký kết cột là phương thức sắc đẹp ký kết phân bóc tách và định lượng sinc chất bên dưới áp suất cao, góp bớt đáng chú ý thời hạn và công dụng, unique so sánh. 

- Các phân tử của trộn tĩnh hoặc hỗ trợ được đậy bởi trộn tĩnh lỏng rất có thể lấp đầy toàn bộ thể tích bên trong ống hoặc triệu tập dọc theo thành ống phía trong để sản xuất một băng thông mở, giới hạn max mang đến trộn hễ lớp giữa của ống (cột hình ống mở). 

- Sự biệt lập về tốc độ di chuyển hẳn qua môi trường thiên nhiên được xem theo thời hạn lưu lại khác biệt của mẫu. 

Cách sử dụng sắc ký cột trong thí nghiệm

4.2. Sắc cam kết Phosphocellulose

- Sắc ký kết Phosphocelluchiến bại áp dụng lực link của nhiều protein liên kết DNA với phosphocelluthua kém.

- Sự thúc đẩy của protein với DNA càng to gan thì độ đậm đặc muối bột quan trọng để cọ giải protein càng tốt. 

4.3. Sắc ký kết giấy

- Sắc ký giấy là 1 trong kỹ thuật liên quan đến sự việc đặt một chnóng nhỏ dại hoặc chiếc hỗn hợp mẫu lên một dải giấy sắc đẹp cam kết. Giấy được đặt trong một thùng đựng với một tờ dung môi nông cùng niêm phong lại. 

- lúc dung môi tăng qua giấy, nó gặp gỡ tất cả hổn hợp mẫu mã cùng bắt đầu dịch chuyển lên giấy với dung môi. 

- Giấy này được làm tự cenlluose, một hóa học phân cực và các phù hợp chất trong các thành phần hỗn hợp di chuyển xa rộng nếu chúng ko phân cực. phần lớn chất phân cực links với giấy celluthua thảm nhanh hao hơn, cho nên vì thế không đi xa được.

Sắc ký kết giấy được làm tự cenllulose

4.3. Sắc cam kết lớp mỏng mảnh (TLC)

- Sắc ký lớp mỏng mảnh (TLC) là 1 nghệ thuật phòng thể nghiệm được thực hiện rộng rãi nhằm phân tách bóc các hóa sinh khác biệt trên cửa hàng rất nhiều điểm đam mê tương đối của bọn chúng đối với pha tĩnh và pha đụng. 

- Nó tựa như nlỗi nhan sắc ký giấy. Tuy nhiên, nạm vì áp dụng pha giấy thắt chặt và cố định, nó bao gồm trộn tĩnh của một tờ chất tiêu thụ mỏng tanh nhỏng silica gel, alumina hoặc cenlluthua kém trên đế phẳng, trơ. 

- TLC tương thích cho các áp dụng lựa chọn như kiểm tra độ đậm đặc thuốc với độ tinh khiết của nước bởi vì kĩ năng lây truyền chéo thấp do các lần phân bóc được tiến hành trên một tấm bắt đầu.

Sắc cam kết lớp mỏng tanh tương thích cho những ứng dụng sàng lọc

4.4. Sắc cam kết dịch chuyển

Nguyên ổn tắc cơ bản của nhan sắc ký di chuyển là một trong phân tử gồm ái lực cao cùng với ma trận nhan sắc cam kết (hóa học dịch chuyển) tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh công dụng cho những vị trí links để thay thế tất cả các phân tử gồm ái lực thấp rộng.